吖啶橙 AO / PI 雙熒光染?試劑盒

貨號：JC0318 

規格：1ml/5ml

產品描述

AO/PI 雙熒光計數法用來檢測細胞濃度和活率。細胞染色液由吖啶橙（綠色熒光染料）和碘化丙錠（紅色熒光染料）混合而成。碘化丙錠（PI）不具有膜透過性，只能進入細胞膜受損的細胞，而吖啶橙能夠穿過所有的細胞群體。當兩種染料同時存在于細胞核中，碘化丙錠通過熒光共振能量轉移（FRET）引起吖啶橙熒光的減少。因此，在 Countstar® Rigel 系統中，具有完整的有核細胞染綠色熒光并被計為活細胞，而具有受損的有核細胞染紅色熒光并被計為死細胞。

吖啶橙(Acridine Orange), 屬于三環雜芳香染料，是經典的、極靈敏的特異染性熒光染料，可以標記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料，AO常用于細胞內DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結合方式主要有：1、插入性結合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結合方式主要為AO與DNA的結合，其熒光發射峰為530nm，激發后呈綠色熒光，其熒光發射峰為640nm，激發后呈紅色熒光，少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結合時發橙紅色熒光。本試劑盒中AO與核酸結合的方式是插入性結合，因此激發后呈綠色熒光。經AO染色后，正常細胞的細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細胞中，因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體，AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。

碘化丙啶(PI)是一種非細胞膜通透性熒光染料，與DNA結合后的最大激發光波長為535nm，最大發射光波長為617nm，不能穿過具有生物活 性的細胞質膜，只能對于壞死細胞因為其細胞膜缺乏完整性而能到達細胞核[1, 2]，并嵌入壞死細胞的DNA雙螺旋形成PI-DNA復合物從而產生紅色熒光，因此PI僅能對死細胞染色，因此被用來區分正常細胞與壞死細胞。須特別注意凋亡細胞會因為其細胞膜的完整性，而無法被PI染色，僅在凋亡后期發生繼發性壞死(Secondary necrosis)時，才能被PI染色。